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求助水样中总DNA 的提取！

作者 eagle_edu: 来源: 小木虫 1150 23 举报帖子

目前，我用MoBio 强力土壤 DNA 提取试剂盒 PowerSoil™ DNA Isolation Kit 提取油田水样中的微生物总DNA，首先是用0.22的微孔滤膜过滤，然后剪碎加入到试剂盒中，按步骤提取，为什么总是提不出来？实验室室温10-14度，谢谢！返回小木虫查看更多

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精华评论

cqlsf

建议：1看水样中其他杂质是否过多？是否需要初步沉淀除杂、去油污，去除提DNA的干扰？
2、样品中微生物种群及数量初步估计，数量很多还是极其稀少？是真菌多还是细菌多？G+还是G-? 如果数量极少，需要浓缩富集，是滤膜过滤还是离心沉淀等？
3、提取出来的DNA有时很稀少，常规电泳看不到，可通过PCR放大看看，紫外光度计看看，到底有没有？
祝顺利！
oldflying

水样提取DNA相对来说还是比较容易的，在2004年的Science上有一篇是做的海洋宏基因组的，对你应该有用，你可以去查一下：《Environmental Genome Shotgun sequencing of The Sargasso Sea》
kiruwa

我以前用过和你类似方法,也提不出来,建议你可以采用MO BIO 提取水样的kit. 这个土壤kit似乎对水样没用.
xj8442cn

水样和缓冲液比例是多少？一般加大起始水量，同时减少水量在缓冲液的比例。测出来的量如果很少的话建议用2100检测
mizhoulong

不会吧，我用国产天根的都没问题。当然不是给天根做广告。

估计就是水样中微生物浓度太低了，如果少于比如10E3，估计难于提取吧？
eagle_edu

引用回帖:
2楼: Originally posted by cqlsf at 2013-01-07 09:20:09
建议：1看水样中其他杂质是否过多？是否需要初步沉淀除杂、去油污，去除提DNA的干扰？
2、样品中微生物种群及数量初步估计，数量很多还是极其稀少？是真菌多还是细菌多？G+还是G-? 如果数量极少，需要浓缩富集 ...

是先用滤纸过滤，然后又用滤膜抽滤的，油污应该能除去吧，还有什么好的方法除油污啊？微生物的数量挺多的，能达到10E4
，
eagle_edu

引用回帖:
4楼: Originally posted by kiruwa at 2013-01-07 14:02:59
我以前用过和你类似方法,也提不出来,建议你可以采用MO BIO 提取水样的kit. 这个土壤kit似乎对水样没用.

水样的好贵啊