我扩增一个序列,做克隆,是直接用菌液测序好呢还是用菌液PCR后测好啊?请求指点 返回小木虫查看更多
个人感觉还是菌液好,pcr只做为初步的验证,里面的成分还有可能影响测序结果,还有就是量的问题,反正送公司他们给做了,自己又不麻烦,还是送菌液好点
既然你要做克隆,还是把基因片段先连在T载体上,测序是还是用菌液送样,因为PCR产物送样有时候测序结果可能不太好,或者在PCR产物中某些序列是发生突变的,这样测出的结果不一定正确(虽然这样的事情发生的几率比较低)
最好是将菌液扩大培养,提取质粒后送测。
PCR后产生的序列并不一定就是模板菌液的序列来的。 不是一般都是挑取单菌落做PCR鉴定,阳性再送测序吗?现在测序才二十来块一个反应,多送几个都没问题。 如果测序反馈菌液浓度太低,考虑是假阳性,或者是菌液浓度不够,但一般只要摇菌2h后出现浑浊基本都是能测出来的,除非里面没有你要的序列。 实在不行的,拿你PCR后的产物重新做一次克隆,再送测序,不过二次PCR产生突变的几率会升高。
还是送菌液PCR产物吧,我们多年的经验告诉我们每次送去的菌液他们都说不行提不出质粒或者浓度太低等等问题。PCR产物就没啥问题。
个人感觉还是菌液好,pcr只做为初步的验证,里面的成分还有可能影响测序结果,还有就是量的问题,反正送公司他们给做了,自己又不麻烦,还是送菌液好点
既然你要做克隆,还是把基因片段先连在T载体上,测序是还是用菌液送样,因为PCR产物送样有时候测序结果可能不太好,或者在PCR产物中某些序列是发生突变的,这样测出的结果不一定正确(虽然这样的事情发生的几率比较低)
可是我送的菌液,人家说浓度低,很多都测不出来,送PCR的话一次就测出来了,下次我再试试
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最好是将菌液扩大培养,提取质粒后送测。
PCR后产生的序列并不一定就是模板菌液的序列来的。
不是一般都是挑取单菌落做PCR鉴定,阳性再送测序吗?现在测序才二十来块一个反应,多送几个都没问题。
如果测序反馈菌液浓度太低,考虑是假阳性,或者是菌液浓度不够,但一般只要摇菌2h后出现浑浊基本都是能测出来的,除非里面没有你要的序列。
实在不行的,拿你PCR后的产物重新做一次克隆,再送测序,不过二次PCR产生突变的几率会升高。
还是送菌液PCR产物吧,我们多年的经验告诉我们每次送去的菌液他们都说不行提不出质粒或者浓度太低等等问题。PCR产物就没啥问题。