SDS-PAGE电泳，菌液总蛋白，染色后显示的是弥散的
用的菌液总单蛋白，考马斯亮蓝人染色几乎没有条带，所以就用了硝酸银染色，结果根本不成条带，完全是成弥散状的，整个泳道都是黑的，同时跑的Marker很正常，考马斯亮蓝染色的条带清晰。
我用这个总蛋白过完DEAE柱子后，因为蛋白含量很低，所以只能用硝酸银染色，染色后的条带还是比较清晰的
请教高人啊，实验没办法继续了！！
补充：样品加入上样缓冲液后不是呈蓝色的而是黄色的。
[ Last edited by 五木凋零 on 2011-5-9 at 17:04 ]
返回小木虫查看更多
今日热帖
京公网安备 11010802022153号
整个泳道都是黑的 说明你银染的水有问题 银染一定要用超纯水！
【补充：样品加入上样缓冲液后不是呈蓝色的而是黄色的。】
这说明，你的样品根本就是呈酸性的。要加大电泳Buffer用量使之呈碱性蓝色。或者用 1M Tris Base加 几uL 到样品里调高pH
很可能是电泳都没有走进胶里面，因而考染没有颜色。蛋白太少了！
银染怎样都会染色的，关键是时间长短，长时间整个胶都发黑。即使没有蛋白！
而同时跑的marker 考染 正常，说明不是染色的问题。
最可能的解释：你的泳道里没有跑进蛋白。
，
是菌液总蛋白跑胶看不到条带吗？你们用个上样缓冲液的PH值有调过吗？上到孔里是黄色，你的样品是呈酸性的。过算的话，蛋白会有水解的可能。跑不出条带也是有可能的。
你的蛋白是在胞内表达吗？我觉得你溶菌体的1X上样缓冲液的量是不是可以少加点。我一般是1ml菌液离下来的菌体。加入40ul的1X上样缓冲液，上样上10ul，跑出来的条带还是挺清晰的
我的银染操作没有问题，因为我不只做了这个银染，其他的效果都很正常
正在尝试用比较碱的缓冲液来溶解我的蛋白样品，不知道结果怎么样