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【求助】western blot 湿转缓冲液甲醇作用

作者 linyingjia: 来源: 小木虫 400 8 举报帖子

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甲醇什么作用呢

我们一般要求250ma恒流电压维持在40v以上

甲醇应该先加还是后加啊甲醇和水的加入顺序和电压有关嘛甲醇的量和电压有关嘛返回小木虫查看更多

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精华评论

314300420

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Originally posted by linyingjia at 2011-04-11 18:05:04:
甲醇什么作用呢

我们一般要求250ma恒流电压维持在40v以上

甲醇应该先加还是后加啊甲醇和水的加入顺序和电压有关嘛甲醇的量和电压有关嘛

甲醇应该和转缓先混合（一般说的湿转缓冲液都是含有20%甲醇的），4℃预冷后使用，甲醇浓度不低于10%，不高于20%，可以起到固定作用，既可以固定胶的形态不至于变形，也可以使蛋白结合到膜上更稳定。恒流时电压必定会变化的，电压大小不用管，转膜时电压会慢慢变�
，
ujsyangyong

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Originally posted by 314300420 at 2011-04-12 11:10:01:
甲醇应该和转缓先混合（一般说的湿转缓冲液都是含有20%甲醇的），4℃预冷后使用，甲醇浓度不低于10%，不高于20%，可以起到固定作用，既可以固定胶的形态不至于变形，也可以使蛋白结合到膜上更稳定。恒流时电压必 ...
紫琳

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Originally posted by 314300420 at 2011-04-12 11:10:01:
甲醇应该和转缓先混合（一般说的湿转缓冲液都是含有20%甲醇的），4℃预冷后使用，甲醇浓度不低于10%，不高于20%，可以起到固定作用，既可以固定胶的形态不至于变形，也可以使蛋白结合到膜上更稳定。恒流时电压必 ...

转膜临用前加20%甲醇。预先配的转膜缓冲液不含甲醇。
紫琳

预先配的转膜缓冲液放在4度。
紫琳

用过的转膜缓冲液可以重复用几次，也是临用前少加一些甲醇即可。

注意转膜时甲醇必须加否则转不上。膜和胶都要用转膜buffer浸泡10～30min。
耽于美色

弱弱的问一句：湿转和浸泡PVDF膜时候的甲醇可以用色谱纯的吗？
zhaoxr0311

你要湿转最好在4°转，因为会产生大量的热，影响转膜效果。
像转膜液应该提前配好，在配置的过程中会产热，所以先放4°冷却，避免影响转膜
甲醇起到固定作用，据我所知跟电压没有关系，跟电压有关的是里面的离子，比如甘氨酸之类的