【求助/交流】连接后的问题
我将一个1500bp的片段连接到载体中,做菌落PCR有目的片段,大小也合适,但是提取质粒酶切验证只有1200bp,再做PCR也P不出来了。用下游引物测序后进行比对也是需要的片段。这到底是怎么回事啊?会不会我只是转进去一部分,可是用的是双酶切啊!请教大家! 返回小木虫查看更多
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我将一个1500bp的片段连接到载体中,做菌落PCR有目的片段,大小也合适,但是提取质粒酶切验证只有1200bp,再做PCR也P不出来了。用下游引物测序后进行比对也是需要的片段。这到底是怎么回事啊?会不会我只是转进去一部分,可是用的是双酶切啊!请教大家! 返回小木虫查看更多
怎么不测通啊!
觉得是有点奇怪,会不会是插入片段发生突变,正好产生了一个同上游片段相同的酶切位点,但是质粒pcr出不来有不好解释。转进去一部分,但是菌落pcr 能扩增出1500bp的片段又不好解释。
测通序列比对一下再说吧,
possibly there is an internal restriction site at 0.3 kb from one end.
that explains why you can't get the PCR fragment after digestion.
楼上有理,测通比对下吧。