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对PCR产物加A尾

我用的是高保真酶,PCR产物为平滑末端,如何用Taq酶对PCR产物加A尾?望说得详细一点。谢谢  返回小木虫查看更多

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用户评论

看pGEM-T 载体的说明书,上面有,说明书网上有的下

用过天根的加A反应液,就是利用DNA聚合酶与dATP反应来加A,按说明书操作即可,效果还可以

法一:所有循环结束后,暂停反应,在反应体系中加少量taq酶,72℃40min即可。
法二:pfu和taq混合跑pcr,即可加尾,

我是用TOYOBO KOD-plus扩,加尾很简单,反应结束后,50μ体系中加入1μTaq酶,72度保温10min即可,不需要格外加dATP,因为体系中的dATP是绝对足够的,特别是T载,很好连,也不需要所有的都加上尾巴,有一些就够了。

你用高保真酶正常PCR结束之后,加入taq酶及其相应buffer,72℃半小时即可!

无需加尾,直接连平端载体transgen的pEASY-blunt,双抗(amp+kan),topo克隆5min搞定

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