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金币求助,过柱

现准备装一个内径10cm的硅胶柱,有几个问题想请教一下:
1、准备上样干膏25g,拌样后50g左右,内径10cm是否合适?
2、径高比1:8~10是什么?是装柱后柱子内径与硅胶高度的比例吗?
3、如选择内径10cm的柱子,装柱硅胶高度大概是多少?是80~100cm,这好像不太合适吧,计算一下用的硅胶量太大了
4、如果上样高度1cm,装柱硅胶高度大概多少?
5、内径10cm的柱子,湿法上样好还是干法上样好,湿法上样要加脱脂棉、玻璃球吗?
6、粗分一般设几个梯度?梯度的筛选跑板如何确定?
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用户评论

柱体积一般是浸膏量的10倍,如50克,就应用体积约500ml的柱子。

50g的样至少应该用装柱后十倍的高度的硅胶 可以大概看下高度 克数不是严格限定的;一般大柱子用干法比较省溶剂,不过看你用的什么洗脱剂了,有的易挥发的在天热的时候很容易花柱影响效果,所以一般不是特别大的我们还是用湿法装好;是说下面的脱脂棉吗,这个和干法湿法关系不大啊,看个人习惯了,我们一般都加,然后顶上洒硅胶或海砂防止液体砸坏样品层;梯度的设置也不是限定的 看你要哪些东西了,根据你要分得的东西在薄层上的状态来选,虽说粗分但还是能得到最好啊,薄层比例不能照搬到柱子上就得到板上的效果。

这些都是不好说的得具体分析啊,薄层跑的怎么样啊~

很多人采用干法装柱,因为干法比较省溶剂;但是湿法装柱还是很好的,因为容易装得均匀,而且也容易使柱子浸透。我们最近都是采用湿法装柱,效果都挺好的。一般粗分不要分得太细,这样容易把东西都分散了,最后做起来很麻烦的。在薄层板上尽可能把你要的东西尽可能的分开一点,一般薄层板的效果和柱子上的还是有很大区别的

这些问题都是要你自己来实验回答的,没人能告诉你。
要注意的问题很简单,就是如下:
1.你的25g硅胶最大上样量多少要估算一下,保证上样不要超过最大上样量即可。不用管它多高。。
2.要保证能至少用三倍柱体积冲洗每个部位。这就和你的硅胶量和柱内径有关了,但是最好保证三倍柱体积的流动相能完全承载在柱子里,否则就要两次加流动相,麻烦又容易破坏顶层硅胶已形成的稳定状态。
3.分几个梯度要看你分什么了。只要保证最后那个组分流出来后,硅胶里基本没有什么化合物就行了。这个你可以用HPLC检测
PS:过柱子需要你摸索的,只有经验,没什么现成理论可谈的。不要太在意那些数字,多去想想为什么,

1. 25g 样品用10cm的柱子有点太粗了,大约250-500g的硅胶就可以了

Originally posted by yqx1985 at 2009-9-9 14:13:
这些问题都是要你自己来实验回答的,没人能告诉你。
要注意的问题很简单,就是如下:
1.你的25g硅胶最大上样量多少要估算一下,保证上样不要超过最大上样量即可。不用管它多高。。
2.要保证能至少用三倍柱体积 ...
能分出来就是硬道理是吗?

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