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[求助]提取总RNA必须要用多少pH值的苯酚??

作者 erictan2046
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  • 精华评论
  • jack6335

    ???不是只用TRIZOL,氯仿,异丙醇,75%乙醇,RNase-free water就行了吗?还要用苯酚吗?

  • djrhewc

    我们好像也没用到...

  • linxi8579

    我们提RNA是用的试剂盒,好像里面也没有苯酚。就是有裂解液,洗脱液,漂洗液等等,问起来好像没有。我记得的具体的就是用乙醇来沉淀,还有用RNAse-free水溶解。

  • gastrodia

    NaAc饱和酚,pH4.5,酸性环境是抽提RNA必须的,过酸又会导致RNA酸水解,使用酸酚抽提,在加入氯仿涡旋后离心,RNA处于微酸性的水相,DNA和蛋白质被压在两相之间(如果两相你都不知道,那基础太差,找本分子克隆来see吧),如果上层水相呈碱性,DNA会混在RNA之间

  • erictan2046

    谢谢各位虫友,原来!我之前用的苯酚是pH7.8~8.0提取DNA的,原本以为这样没有差别,但是这点就出错了!我老是做来做去做不出东西来!还真的不知道呀!枪头什么都用DEPC处理了,但是还是不行~我觉得没理由啊~想来想去苯酚出问题了!

    [ Last edited by erictan2046 on 2009-9-9 at 20:03 ],

  • erictan2046

    en en

    [ Last edited by erictan2046 on 2009-9-9 at 20:36 ]

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