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加抗生素的平板,目的基因连接转化,菌长成一片,求指导

目的片段连接的T1载体,转化的dh5α,平板加的卡那抗生素,为什么培养基会长成一片?我凃板时,涂了好久,干了啊?有没有可能是目的片段插到了卡那抗性的那个基因位点?请问那个目的基因连接在载体上是随机连接上的吗,还是就是固定连接在lacz那个位置的?小白研究生,刚刚新建的实验室,就只有我一个人,啥都不懂,好慌,求大神详细指点
加抗生素的平板,目的基因连接转化,菌长成一片,求指导
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加抗生素的平板,目的基因连接转化,菌长成一片,求指导-1
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用户评论

转化时加的重组质粒太多了吧

抗生素时效

浓度低点试试

抗生素问题概率大一点,连接产物  也不会长这么多

抗生素失效

抗生素可能不行了

抗生素要配成一千倍母液,-20度保存。用的时候,等培养基晾到不烫手的时候加进去,摇匀后倒平板。

卡那霉素不好使了的可能性要大一些。

有可能是抗生素失效,也有可能是你涂平板的体积太大,浓度太高。

考虑以下处理:换不同菌株重新制备感受态细胞,换新的抗生素,转化液在不确定转化效率的情况下每个板加的量成倍数减少。

抗生素失效

我之前也遇到过这样  抗生素失效

抗生素问题

抗生素失效了,不然就是菌液浓度太大,涂的菌液太多。抗生素失效的概率大

抗生素失效了,我之前也遇到过这种情况,重新配板吧

涂多了,80ul就差不多

抗生素失效了吧

没连上,再连吧

股匚侍饪赡苄源笠恍赡芸股厥В蛘呶露忍撸坝杏龅焦嘌露鹊涂炷碳涌股匾不嵊姓庵智榭觥4送猓笠【奔涫欠裉ぃ看送饽阌玫膒easy t1?这个载体有两种抗性,换amp试试,

t载体是ta连接,目的片段不会随机连的,重新配抗生素吧

应该是抗生素的问题,以前也遇到过,这个建议使用amp+kn同时筛

两种问题,第一,板抗性不对、连接的产物不起抑制作用。第二,杂菌污染了,操作可能不规范。

可能是抗生素失效,概率大点

抗生素有问题,或者链接失败,或者感受态有问题

你用感受态细胞了吗?是感受态被污染了

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