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分类 共搜索到 207 个相关话题(最多显示前5000个) 作者 最后发表
分子生物 PCR的时候点孔很亮,但是跑不出目的基因,请问是什么原因。
跑了好几天PCR,都跑不出带来,我以为是引物有问题,我用了一个旧的曾经跑出过带的DNA样本,以及3个新提取的DNA样本跑PCR,结果旧DNA样本跑出了条带,新DNA样本没跑出目的条带,就是点样孔...
penglu28 2020-05-03 03:32
硕博家园 跑不出目的条带,二聚体很亮
向各位大神求助,最近总是跑不出目的条带,引物二聚体特别亮,marker跑出来没有问题,这是什么原因呢我用的pcr体系10μL,引物各0.5μL,dna模板1μLdd水3μL,2×Raquelmix5μL胶图中的2-7泳道...
微笑0692 2019-08-29 03:25
分子生物 PCR技术大攻略
8.电泳时使用dna分子量标准品(指示是否pcr失败或条带跑出凝胶或拍照系统失败)。9.当扩增很长的、gc含量高的模板时或容易产生...4.扩增产物出现多条带(1)引物用量偏大,引物的特异性高。...
anfen2366 2019-06-14 09:48
微生物 菌液跑pcr几天了都有很多杂
和同学用的一样的大肠杆菌菌液同学做的鉴定试验都跑出目的条带且成功(所以感觉不是菌液的问题)我做的耐药基因检测每次都有很多杂带用的引物是文献里找的且他们都成功了温度是结合了文献...
furybeta 2019-03-21 12:11
生物科学 胶回收
各位大神,核酸浓度为150多ng每微升的目的基因pcr在电泳...酶切连接后做pcr验证电泳发现没有出条带,说明目的基因没有连接上,可是操作都是很仔细的,知道是为什么,还有就是胶回收的...
李飞不会飞 2019-03-08 07:04
生物科学 qPCR过表达成功为何western跑不出flag?
qPCR用融合基因A的引物能正常扩增,且相对表达量比空载组高3000倍,PCR产物琼脂糖凝胶电泳也能看到明显过表达的条带。由于没有该...1)为何基因层面过表达明显但蛋白层面几乎看不出过表达?...
圣灵之心 2019-02-25 02:21
转基因 【技术前沿】F类腺相关病毒载体介导的高效基因编辑技术
2端的ITR很有可能会互补形成“snapback”结构而在电泳时的很快,若存在Rosa26-Luc包装AAVHSC15病毒载体双链,会通过SpeI酶切后经过southernblot得到2783bp目的条带。很明显,D图第5个孔都...
百奥赛图 2019-01-09 03:22
分子生物 pcr跑不出目的条带
之前梯度的时候跑出来了想要的条带,这几天在同样的温度下怎么都跑不出来,只有二聚体,请各位给看一下什么情况,体系是buffer2.5dntp2.0mg1.5cdna1f1r1extaq0.2ddh2o补齐至25pcr体系是94...
请教各位 2019-01-06 05:14
分子生物 PCR后,没有目的条带,只有弥散带
目的条带在2800bp,引物合成单上两条引物tm值相差不大,均值52...之前可以扩出目的条带来,已验证不是模板和引物的问题1%的胶marker的很清楚,没有弥散,应该不是电泳的问题,那么反应体系出...
娇娇花儿 2018-10-08 01:52
分子生物 关于基因转移获取目的基因的相关实验
但是使用以前之前有的cDNA文库进行目的基因扩增,然后琼脂糖电泳并未跑出目的条带,所以想采用别的cDNA序列进行扩增。因为我目前...利用已经合成的引物进行PCR,然后进行琼脂糖电泳,查看能否...
v2zs 2018-09-17 02:02
生物科学 这其实是一个实验室小白关于PCR的问题
我们的是1.5%的琼脂电泳,marker用的2000的,最终结果是,除了...但只跑出一管的条带,且大小与预计大小相差甚远)求助,我们的目的是鉴定细胞中确实有某种rna特异性表达,应该从哪里下手呢?...
ATOY 2018-09-08 12:54
硕博家园 PCR相关:我的PCR结果重复出来,求大神指教!
NCBI没有其序列,我就用其他鱼的该基因的序列设计的引物,以CDNA为模板,引物合成回来后跑PCR,经过条件摸索有两次是可以扩我的目的条带的,后来我又用同样的反应条件再也扩增出来了。...
wiyi312 2018-07-26 07:19
硕博家园 pcr引物设计相关:我这样设计引物可可以呢?
技术帮我设计的引物,合成回来后我了梯度PCR,刚开始是可以扩出来二聚体以外的条带的,但太像目的条带,因此又按相同的条件扩了下,后来...因为引物二聚体非常严重,加模板都可以扩二...
wiyi312 2018-07-24 10:28
分子生物 PCR知识知多少
降落PCR代表了一种完全不同的PCR优化方法,它不是用许多反应管和每管用不同的试剂浓度和循环参数,而是用一个...引物用量过多,容易导致引物二聚体(电泳时位于前方不成条带的小片段)的出现。...
华联科生物 2018-07-10 10:52
分子生物 酚抽DNA以及连接转化构建载体问题求助
菌长出来,指导老师认为是切胶回收的胶里有抑制连接的物质...没有用氯仿除酚,盐加过量,这些可能导致出不来,但实际上这样酚抽完电泳是能看到目的片段条带的。后来按照老师说的改正了酚抽...
室宜家宜 2018-06-23 03:01
分子生物 有关融合pcr的一些问题。
想问下,为什么融合完以后的基因片段,回收以后会跑出好多条带了呢?反而目的片段就多了,这是什么情况?
陈西瓜 2018-06-15 11:18
分子生物 【求助】连接转化大肠杆菌,菌落PCR跑不出条带
转化的大肠杆菌一个板子只有到20个菌落,挑单克隆做菌落...连接产物单独拿出来做PCR是可以扩增出来目的条带的,现在就是明白长满了板子的菌落真的都会是阴性吗?到底问题在哪里呢?求...
ffffang1234 2018-06-07 02:41
分子生物 PCR知识知多少
降落PCR代表了一种完全不同的PCR优化方法,它不是用许多反应管和每管用不同的试剂浓度和循环参数,而是用一个...引物用量过多,容易导致引物二聚体(电泳时位于前方不成条带的小片段)的出现。...
华联科生物 2018-05-30 08:42
分子生物 胶回收和PCR阴性对照污染问题咨询
发现阴性对照也能扩出条带,...2.我对一段目的基因进行割胶回收,大小1900,回收前出来的电泳是含不少杂带的,目标条带大小与非特异条带大小至少有56百bp的区别,同时阴性对照没显示有问题。...
quzhongzhi 2018-04-21 01:17
生物科学 PCR
引物确定没问题,DNA确定没问题,为什么扩增不出目的条带,电泳胶除了mark什么都没有
小海666 2018-04-09 08:54
分子生物 PCR 跑不出目的条带为什么?
PCR为什么跑不出来目的条带,只有引物二聚体?试了引物稀释10倍,酶也换了别人的试了一下,模板也稀释了10倍,为什么都跑不出来
小蝈蝈蝈 2018-03-30 01:39
分子生物 PCR出来,求助
目的片段是330bp,Tm值是59℃,扩增了好多次一直出不来...预变性94℃,2min变性98℃,10s退火59℃,30s延伸68℃,30s用的循环次数是35次,扩增了8个品种,电泳以后目的条带出来了,但是有很...
starry_9 2018-03-28 02:00
分子生物 可否用亲缘菌所含某种酶的基因序列设计引物来验证我的菌是否含有...
我想要请教各位,我可否利用此文献中所给的引物,使用普通PCR方法验证我的唾液乳杆菌中是否含有这种酶?...如果可行的话,那么请问是否只要能跑出条带就证明我的菌里面含有这种酶?...
金色海豚 2018-03-15 10:22
分子生物 PCR扩增不出目的条带
最近做PCR扩增小鼠组织DNA,但一直扩不出条带,以前随便做都能扩出很好的条带(如图一),但最近一直做不出来,出来的图都是那个鬼样(如图二),不知道什么原因。PS:DNA检测过了,没...
木叶林森 2018-02-27 03:09
硕博家园 最近做的原核表达载体构建总出现问题,希望大家给予帮助,谢谢!
2微升/种DDwater加切胶回收后备用(以DDwater洗脱,浓度约...16℃)目的片段:12pET32a:4T4DNALigase:310*T4DNALigasebuffer:1DDwater加琼脂糖电泳结果出现2条带,一个是5000多一点儿的,...
永远不必等 2018-02-02 07:32