若条带有弥散，即自目的条带以下有拖痕，不是清晰利落的一条带，则质量不好。因为条带拖痕表示它已碎裂成比它小的各种长度的片段，而主带虽然还在那个位置但...长片段的连接转化时摇菌2小时。...

诚恳求教:连接的载体转化大肠杆菌后能长菌，长得不多不少，跟平时连T载体的斑点差不多，但是跑PCR检测什么条带都没有，到底是哪里有问题，求高手指点！谢谢！

一开始我认为是insert和vector的量不够（起初做的是25ng的载体，10ul连接体系），转化出的大肠杆菌一个板子只有不到20个菌落，挑单克隆做菌落PCR也看不到条带。后来又重新建立连接体系，...

野生的片段大跑的慢，单敲的会出现两条带从而鉴别开来）。...或者换句话说，将不同大小的基因片段克隆在同一种质粒载体转化进入大肠杆菌，在同一个培养皿中培养，它们会分布在不同的菌落上吗？...

分别分步酶切，回收效果还可以，然后连接T4连接酶16度过夜，然后转化大肠杆菌，然后菌落PCR鉴定阳性克隆，菌落PCR跑出来的大小...今天我用ApaI切，出来了一条明亮的条带，也只有5000Bp,不知...

MARKER每个条带约50ng。连接反应：TAKARA的连接酶上的说明...现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。...

bp，酶切后，跑出来两条少于3000bp的条带，就说明酶切完全了，如果不完全的话电泳还会跑出3000bp的条带。...这可能是由于大肠杆菌感受态细胞转化率低或者大肠杆菌无法忍受克隆序列引起，还有...